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熒光分光光度計的基本測定流程

更新時間:2021-03-30瀏覽:1998次

   熒光分光光度計的基本測定流程

  熒光分光光度計是一種常用的光度計產(chǎn)品,主要用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜,被廣泛用于多個行業(yè)中。今天我們主要來介紹一下它的基本特點及操作,希望可以幫助用戶更好的應(yīng)用產(chǎn)品。
  它能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。能夠?qū)?jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析,可應(yīng)用于生物化學、生物醫(yī)學、環(huán)境化工等部門,可以說是有很重要的用途。
  基本測定:
  (1)熒光激發(fā)光譜測定
  設(shè)置熒光分光光度計參數(shù),掃描發(fā)射波長,找到maxλem,以此為發(fā)射波長,記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長的函數(shù),便得到激發(fā)光譜。
  (2)熒光發(fā)射光譜測定
  設(shè)置儀器參數(shù),掃描激發(fā)波長,找到maxλex,以此為激發(fā)波長,記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系,便得到熒光發(fā)射光譜。
  (3)差譜測定
  設(shè)置儀器參數(shù),選擇合適的工作方式,測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來,在一定的工作方式下,掃描樣品溶液的發(fā)射波長,得到當時的光度值和儲存的背景值之間的差示值,即差譜。
  (4)峰面積積分
  選擇適當?shù)墓ぷ鞣绞剑瑢悠啡芤哼M行積分操作,即得到峰面積積分。
  (5)熒光強度
  選擇合適的測量參數(shù),設(shè)置λex、λem,采用定點讀數(shù)或掃描方式,即可測得所選波長處的熒光強度。
  (6)定量測定
  配制一系列已知濃度的標準溶液,在一定的測定條件下,設(shè)置λex、λem,按照由稀至濃的次序,測定標準溶液的熒光強度,繪制熒光強度—濃度的工作曲線,不改變熒光分光光度計參數(shù)測定未知溶液的熒光強度,由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。

 

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